pewarnaan spora metode schaeffer fulton

Tujuan : Untuk mengetahui ada tidaknya spora beserta letaknya pada bakteri.

Prinsip: Sel vegetative berwarna merah, spora berwarna hijau dengan background berwarna merah muda, apabila bakteri berspora dilakukan pengecetan dengan metode schaffer fulton.

Alat dan Bahan:

• Ohse bulat
• Objeckglass
• Jembatan pengecetan
• Malachite green
• Gram D
• Mikroskop
• Emersi oil
• Spirtus dan pembakar spirtus

Cara kerja 

Pembuatan preparat

• Siapkan objeckglass yang bersih, kering dan bebas lemak
• Labelisasi
• Ambil 2-3 ohse bakteri dengan ohse bulat taruh ditengah-tengah objeckglass
• Ratakan dengan panjang ±2cm, dan lebar ± 3cm (bentuk oval), secara aseptis
• Kering anginkan, fiksasi diatas nyala api 3x

Pengecetan

• Siapkan preparat yang sudah jadi dan taruh di jembatan pengecetan
• Genangi preparat dengan malachite green, kemudian dipanadi sampai keluar uap 3x, tunggu dingin 5-10 menit
• Buang sisa cat, cuci dengan air mengalir
• Genangi dengan gram D selama 30 detik
• Buang sisa cat, cuci dengan air mengalir, kering anginkan
• Periksa dibawah mikroskop dengan perbesaran 1000x  dengan penambahan emersi oil

Hasil:

Pembahasan:

spora adalah endospora, suatu bada yang refraktil terdapat pada induk sel, merupakan suatu stadium dorman dari sel vegetatif.

Faktor-faktor yang mempengaruhi pengecatan spora:

• Fiksasi
• Smear terlalu tebal
• Waktu pengecatan tidak tepat
• Konsentrasi reaagen
• Umur bakteri
• Nutrisi

Ada 2 jenis bakteri yang dapat membentuk spora

• Clostridium adalah bakteri yang bersifat anaerob
• Bacillus adalah Bakteri yang bersifat aerob

Stuktur endospora berbeda-beda untuk setiap spesies

• Clostridium botullinum: sporanya subterminal
• Clostridium tetani:sporanya terminal
• Bacillus anthracis: sporanya central

Endospora bakteri merupakan struktur yang paling tahan terhadap lingkungan yang ekstrim misalnya kering, kepanasan, dan keadaannya asam.

Macam-macam metode pengecetan

• Schaffer fulton
• Klein vedder
• Bartolomew mittler

 

• Core: sitoplasma dari spora yang didalamnya terkandung semua unsure untuk kehidupan bakteri seperti kromosom yang komplit, komponen- komponen untuk sintesis protein dan sebagainya.
• Cortex: lapisan yang paling tebal dari spora envelope, terdiri dari lapisan peptidoglikan tapi dalam bentuk yang istimewa.
• Dinding spora: lapisan paling dalam dari spora, terdiri dari peptidoglikan dan akan menjadi dinding sel bila spora kembali dalam bentuk vegetative.
• Eksosporium: lipoprotein membrane yang terdapat dari luar.
• Coat: terdiri dari zat semacam keratin, dan keratin inilah yang menyebabkan spora relatif tahan terhadap pengaruh luar.